The Jacks Lab
protocols

miR-106b~25 (chromosome 5 locus)

 

Reaction Mix (25ul):

Tail DNA 2.0ul
NTPs 0.5ul
10x PCR buffer 2.5ul
AV 65 0.1ul
AV 66 0.05ul
AV 133 0.05ul
milliQ 19.6ul
Taq (1/10) 0.2ul

 

10X PCR Buffer:

500 mM KCl
100mM Tris pH 8.3
15 mM MgCl2
1 mg/ml BSA
2 mM dNTPs
dH20

(store at -20 C)

 

PCR Primers: All used at 100um

AV 65 5' TCC ACT GCT CTG GTG AGT GG 3'
AV 66 5' TGC TCC AGC TTC AAG CCT GG 3’
AV 133 5’ AGC AAG TAC CCA CAG TGC GG 3’

PCR Conditions:

1. 94C 5:00
2. 94C 0:30
3. 55C 1:00
4. 72C 1:30
5. Goto 2 x34 cycles
6. 72C 5:00
7. 4C 0:00
END

Expected Bands:

WT 170bp

 

Mut KO

260bp